林惠, 黄红叶, 伍诗烨, 林志刚, 陈水金, 陈乐春, 蒋晶晶, 张幻真, 陈进城
中华中医药杂志. 2025, 40(7): 3435-3442.
目的:从N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(NR2B)/细胞外信号调节激酶(ERK)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)通路探讨推拿治疗神经病理性疼痛(NP)的可能作用机制。方法:60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、推拿组、NR2B抑制剂组和NR2B抑制剂+推拿组,每组12只。除空白组外,其余组别大鼠均制备为坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型大鼠。在造模后第4天开始,推拿组介入推拿干预,每次10 min,每日1次;NR2B抑制剂组与NR2B抑制剂+推拿组在初级体感皮层(S1)脑区注射NR2B受体抑制剂地佐环平(MK-801)0.5 μL,每日1次;NR2B抑制剂+推拿组在注射30 min后介入推拿干预,时间方法同上,各组均连续干预14 d;空白组和模型组不予任何干预措施。观察各组大鼠在造模前1天和造模后第4、10、14、17 d自发痛评分和机械痛阈值的变化。各组大鼠取材结束后,采用HE染色观察S1脑区神经元数量和形态,透射电镜观察S1脑区神经元突触结构,免疫荧光染色和蛋白免疫印迹法检测S1脑区NR2B、p-ERK、ERK、p-CREB、CREB荧光阳性表达及蛋白表达,实时荧光定量PCR检测S1脑区NR2B、ERK、CREB mRNA表达。结果:与空白组比较,模型组从造模后第4天开始自发痛评分显著上升,机械痛阈值显著下降(P<0.01);与模型组比较,推拿组、NR2B抑制剂组和NR2B抑制剂+推拿组在造模后第10、14、17天自发痛评分显著下降,机械痛阈值显著上升(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组S1脑区神经元形态损伤且数量减少,突触间隙变窄,突触个数、突触后致密物厚度、突触活性带长度均增加(P<0.01);与模型组比较,推拿组、NR2B抑制剂组和NR2B抑制剂+推拿组S1脑区神经元形态及突触结构有所改善(P<0.01)。与空白组比较,模型组S1脑区NR2B、p-ERK、p-CREB荧光阳性表达、蛋白表达及NR2B mRNA表达均显著上升(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,推拿组、NR2B抑制剂组和NR2B抑制剂+推拿组S1脑区NR2B、p-ERK、p-CREB荧光阳性表达、蛋白表达及NR2B mRNA表达均显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论:推拿干预能够有效缓解CCI模型大鼠疼痛行为,其可能通过抑制S1脑区NR2B受体及其下游ERK、CREB磷酸化表达水平,调控S1神经可塑性,从而发挥镇痛作用。