唐洁, 王理想, 陈泽璇, 韩涵, 张彤
中华中医药杂志. 2025, 40(5): 2440-2446.
目的: 测定疏肝脂方所含主要药效物质的含量,并探讨和揭示其药效物质抗非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的作用机制。方法: 采用高效液相色谱法同时测定疏肝脂方中5种指标成分的含量;建立体外NAFLD细胞模型,不同浓度的疏肝脂方药效物质单体和疏肝脂方提取物干预处理,采用Western Blot和实时荧光定量PCR检测各组细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路相关蛋白或mRNA水平的变化;建立NAFLD小鼠模型,分为空白组、模型组、辛伐他汀组、柚皮苷组和虎杖苷组,灌胃给药15周,检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,肝脏病理切片经HE染色和油红O染色分析,采用Western Blot和实时荧光定量PCR检测各组小鼠肝脏PPAR通路相关蛋白或mRNA水平的变化。结果: 疏肝脂方中柚皮苷和虎杖苷含量相对较高。与空白组比较,FFA组PPARγ、FADS1、PCK1蛋白及mRNA表达水平显著下调(P<0.01,P<0.05),PLIN2、ACSL4蛋白表达显著上调(P<0.01,P<0.05)。与FFA组比较,疏肝脂方组FADS1、PCK1、PLIN2和ACSL4蛋白表达显著逆转(P<0.01),虎杖苷组和柚皮苷组PPARγ、FADS1、PCK1、PLIN2、ACSL4蛋白表达显著逆转(P<0.01,P<0.05),橙皮苷组、大黄素组、柴胡皂苷A组、白藜芦醇组、特女贞苷组PLIN2、ACSL4蛋白表达显著下调(P<0.01,P<0.05),白藜芦醇组中PPARγ蛋白表达显著增高(P<0.05),柴胡皂苷A组FADS1蛋白表达显著上调(P<0.01),特女贞苷组FADS1、PCK1蛋白表达显著上调(P<0.01),辛伐他汀和疏肝脂方的7个药效单体成分均可显著上调PPARγ、FADS1 mRNA水平(P<0.01,P<0.05),辛伐他汀、白藜芦醇、橙皮苷、虎杖苷、特女贞苷及柚皮苷还可显著增加PCK1 mRNA水平(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠血清TG、TC及LDL-C含量显著升高(P<0.01);与模型组比较,柚皮苷组和虎杖苷组小鼠TG、TC及LDL-C含量显著下降(P<0.01),模型组小鼠肝脏组织出现脂肪变性,而柚皮苷和虎杖苷可缓解模型小鼠肝脏的脂肪变性;同时,与空白组比较,模型组小鼠肝脏样本中PPARγ、FADS1、PCK1蛋白和mRNA表达水平显著下调(P<0.01,P<0.05),而PLIN2、ACSL4蛋白和mRNA表达水平显著上调(P<0.01);与模型组比较,柚皮苷和虎杖苷可显著逆转PPARγ、FADS1、PCK1、PLIN2、ACSL4蛋白(P<0.01,P<0.05)和PPARγ、PCK1、PLIN2、ACSL4 mRNA表达水平(P<0.01),虎杖苷组FADS1 mRNA水平显著升高(P<0.01)。结论: 疏肝脂方通过调节PPAR信号通路相关靶点来发挥其抗NAFLD的疗效,主要依赖于包括柚皮苷和虎杖苷在内的药效物质基础。