目的:基于盐诱导激酶2(SIK2)-CREB调节转录共激活因子1(CRTC1)通路探讨柴胡疏肝散改善围绝经期肝郁证的相关机制。方法:采用去势+慢性温和不可预知性应激(CUMS)法建立围绝经期肝郁证模型。24只雌性C57BL/6小鼠按体质量分层随机分为假手术组、围绝组、围绝肝郁组和柴胡疏肝散组,每组6只。通过旷场实验(OFT)、强迫游泳实验(FST)和糖水偏好实验检测小鼠行为学变化;ELISA法测定小鼠血清雌二醇(E2)、促卵泡素(FSH)、5羟色胺(5-HT)和多巴胺(DA)水平;尼氏染色观察海马神经元形态结构; Western blot法检测海马SIK2、CRTC1、磷酸化CRTC1(pCRTC1)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)的蛋白相对表达量;免疫荧光标记法检测海马突触后致密蛋白95(PSD95)和缝隙连接蛋白36(Cx36)表达。结果:与围绝肝郁组比较,柴胡疏肝散组小鼠的焦虑、抑郁样行为明显改善,FST不动时间显著缩短(P<0.05),1%蔗糖水偏好率显著升高(P<0.01);血清FSH水平显著降低,E2、5-HT和DA水平显著升高(P<0.01);海马神经元损伤程度减轻;SIK2-CRTC1通路相关蛋白表达被不同程度逆转,以pCRTC1表达降低最为显著(P<0.01);PSD95、Cx36蛋白阳性表达亦显著提高(P<0.01,P<0.05)。结论:柴胡疏肝散可在一定程度上调控SIK2-CRTC1通路的表达,减轻海马神经元损伤,改善围绝经期肝郁证小鼠焦虑抑郁样行为。
目的:探讨肾气丸加减方通过调控PI3K/A k t/G S K -3β信号通路保护胰岛β细胞功能的机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为空白组(n=10),模型组(n=12),肾气丸加减方低(n=11)、中(n=12)、高(n=12)剂量组,罗格列酮组(n=11)以及通路阻滞剂组(n=10)。观察小鼠体质量、外周糖脂代谢指标、胰岛素分泌水平,Tunel法测定胰岛β细胞凋亡水平,透射电子显微镜观察胰岛β细胞超微结构,Western blot 法检测PI3K/Akt/GSK-3β信号通路以及PDX-1和MafA的蛋白表达水平。结果:干预8周后,与空白组比较,模型组小鼠体质量及空腹血糖水平显著升高(P<0.01),胰岛素分泌水平显著下降(P<0.01),胰岛β细胞凋亡率显著升高(P<0.01);胰岛β细胞PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、p-GSK-3β、PDX-1以及MafA蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),GSK-3β蛋白表达量显著升高(P<0.01),电子显微镜下线粒体嵴结构消失。干预8周后, 与模型组比较,肾气丸加减方高剂量组与罗格列酮组体质量及空腹血糖水平显著降低(P<0.01),胰岛素分泌水平显著升高(P<0.05),β细胞凋亡率显著降低(P<0.01),肾气丸加减方中、高剂量组PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、p-GSK-3β、PDX-1以及MafA蛋白表达量均显著升高(P<0.05,P<0.01),GSK-3β蛋白表达量显著降低(P<0.01),加入通路阻滞剂LY294002后其作用被抵消(P<0.05,P<0.01),电子显微镜下线粒体形态规则,嵴结构存在。结论:肾气丸加减方可作用PI3K/Akt/GSK-3β信号通路改善T2DM小鼠糖脂代谢水平,保护线粒体嵴结构以减少氧化应激对胰岛β细胞的损伤。
目的:观察针刺蝶腭穴对变应性鼻炎大鼠鼻-脾轴免疫炎症的影响,探究其神经-免疫调控作用机制。方法:将24只SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、假针刺组,每组6只。卵清蛋白诱导法建立变应性鼻炎大鼠模型。记录干预前后各组大鼠行为学积分情况,采用甲苯胺蓝染色法、HE染色法分别观察大鼠鼻黏膜、脾脏组织病理形态,ELISA法检测大鼠鼻腔灌洗液中P物质(SP)、神经肽Y(NPY)、卵清蛋白特异性IgE(OVA-sIgE)、白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、IL-10及干扰素γ(IFN-γ)含量; Western blot法检测大鼠鼻黏膜及脾脏组织中ERK、p-ERK、P38、p-P38、JNK、p-JNK蛋白表达。结果:与模型组比较,干预后针刺组行为学积分显著降低(P<0.01),鼻腔灌洗液中的SP、OVA-sIgE、IL-1β、TNF-α、IL-6含量显著降低(P<0.01),NPY、IFN-γ、IL-10含量显著升高(P<0.01),鼻黏膜及脾脏p-ERK、p-P38、p-JNK蛋白磷酸化水平显著下降(P<0.05,P<0.01)。结论:针刺蝶腭穴可调控神经递质SP、NPY的释放水平,并对变应性鼻炎大鼠鼻-脾轴发挥协同抗炎作用,其机制可能与MAPK信号通路有关。
目的:探讨益气化瘀清热方通过调控SIRT1/PGC-1α线粒体生物合成通路中相关因子表达对阿霉素(ADR)诱导小鼠足细胞损伤的改善作用。方法:取分化成熟的足细胞,采用ADR诱导造模,采用siRNA构建PGC-1α转染模型,实验分为:空白组(K组),模型组(M组),益气化瘀清热方组(YQHY组),益气化瘀清热方+PGC-1α转染组(YQHY+siPGC-1α组)。采用RT-qPCR检测线粒体代谢相关基因SIRT1、PGC-1α、TFAM 的表达和线粒体DNA拷贝数,线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅲ检测试剂盒检测线粒体呼吸功能。结果:与K组比较, M组和YQHY+siPGC-1α组中SIRT1、PGC-1α、TFAM mRNA表达量均显著降低(P<0.05);与M组比较,YQHY组 相关mR NA表达量均显著提高(P<0.05)。与K组比较,M组和YQ H Y+s i P G C -1α组线粒体呼吸链复合物Ⅰ、 Ⅲ酶活性显著降低(P<0.05);与M组比较,YQHY组线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅲ酶活性显著提高(P<0.05)。 与K组比较,M组和YQHY+siPGC-1α组线粒体拷贝数表达显著降低(P<0.05);与M组比较,YQHY组表达显著升高(P<0.05)。结论:益气化瘀清热方通过调控SIRT1/PGC-1α通路,促进线粒体生物生成,减轻ADR诱导小鼠足细胞损伤。